DNase I
Ang DNase I (Deoxyribonuclease I) maoy usa ka endodeoxyribonuclease nga makahilis sa usa o doble-stranded nga DNA.Kini nag-ila ug nagputol sa phosphodiester bonds aron makahimo og monodeoxynucleotides o single- o double-stranded oligodeoxynucleotides nga adunay phosphate nga mga grupo sa 5′-terminal ug hydroxyl sa 3′-terminal.Ang kalihokan sa DNase I nagdepende sa Ca2+ ug mahimong ma-activate sa divalent metal ions sama sa Mn2+ ug Zn2+.Ang 5mM Ca2+ nanalipod sa enzyme gikan sa hydrolysis.Sa presensya sa Mg2+, ang enzyme mahimong random nga makaila ug makaputol sa bisan unsang site sa bisan unsang strand sa DNA.Sa presensya sa Mn2+, ang double strands sa DNA mahimong dungan nga mailhan ug mapikas sa halos parehas nga site aron maporma ang flat end nga mga tipik sa DNA o sticky end nga mga tipik sa DNA nga adunay 1-2 nga mga nucleotide nga nagtuybo.
Property sa Produkto
Ang Bovine Pancreas DNase I gipahayag sa yeast expression system ug giputli.
Cmga omponent
| Component | Tomo | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-free | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| 10 × DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10mL |
Transportasyon ug Pagtipig
1. Kalig-on sa Pagtipig: - 15 ℃ ~ -25 ℃ alang sa pagtipig;
2.Transport Stability: Transport ubos sa ice pack;
3. Gihatag sa: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7.6 sa 25 ℃.
Kahubitan sa Yunit
Ang usa ka yunit gihubit ingon ang gidaghanon sa enzyme nga hingpit nga magpaubos sa 1 µg sa pBR322 DNA sa 10 minuto sa 37 ° C.
Pagkontrol sa Kalidad
RNase:Ang 5U sa DNase I nga adunay 1.6 μg MS2 RNA sulod sa 4 ka oras sa 37 ℃ wala maghatag ug degradasyon nga gitino sa agarose gel electrophoresis.
Bakterya Endotoxin:LAL-test, sumala sa Chinese Pharmacopoeia IV 2020 nga edisyon, gel limit test method, general rule (1143).Ang sulod sa bacterial endotoxin kinahanglan nga ≤10 EU/mg.
Mga Instruksyon sa Paggamit
1. Andama ang reaksyon nga solusyon sa RNase-free tube sumala sa mga proporsyon nga gilista sa ubos:
| Component | Tomo |
| RNA | X ug g |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, RNase-free(5U/μL) | 1 U kada μg RNA |
| ddH2O | Hangtod sa 10 μL |
2.37 ℃ sulod sa 15 minutos;
3. Idugang ang termination buffer aron mahunong ang reaksyon, ug init sa 65 ℃ sulod sa 10 ka minuto aron ma-inactivate ang DNase I. Ang sample mahimong direktang gamiton para sa sunod nga transcription experiment.
Mga nota
1. Gamita ang 1U DNase I kada μg sa RNA, o 1U DNase I sa ubos sa 1μg sa RNA.
Ang 2.EDTA kinahanglan idugang sa usa ka katapusang konsentrasyon nga 5 mM aron mapanalipdan ang RNA gikan sa pagkadaut sa panahon sa dili aktibo nga enzyme.
