RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Kini nga produkto adunay reaction buffer, RT-Enzymes Mix (Bst DNA polymerase ug heat-resistant reverse transcriptase), lyophilized Protectants ug chromogenic dye components.Aron magamit, gamita lang ang Buffer, ang reaksyon nga enzyme ug primer gisagol ug gidugang sa template;ang pagdugang sa lyophilized protectant mahimong tul-id.Gidugtong kini sa usa ka lyophilizer ug lyophilized, ug ang mga primer ug templates ra ang gidugang kung gigamit.Kini nga kit naghatag usa ka paspas, tin-aw nga visual detection sa amplification, nga negatibo nga reaksyon gipakita sa pula ug positibo nga reaksyon gipakita pinaagi sa pagbag-o sa yellow.
Component
| Component | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Loop-mediated Amplification Buffer (uban ang tina) | 0.96 mL | 4.80 mL×2 | 9.60 mL×10 |
| Pagsagol sa RT-Enzymes | 270 μL | 2.70 mL | 2.70 mL×10 |
| Lyophilized nga tigpanalipod | 0.96 mL×2 | 9.60 mL×2 | 9.60 mL×20 |
Mga aplikasyon
Para sa DNA o RNA isothermal amplification.
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Gidala sa Dry ice, gitipigan sa -25~ -15 ℃.Likayi ang kanunay nga freeze-thaw, ang produkto balido sulod sa 12 ka bulan.
Protokol
1.Ibubo ang reaction buffer nga gamiton sa temperatura sa lawak.Vortex sa makadiyot o balit-aron ang mga tubo sa makadaghang higayon aron maayo ang pagsagol, dayon centrifuge aron makolekta ang likido sa ilawom sa tubo.
2.Pag-andam sa sistema sa reaksyon.Kini nga reagent mahimong maandam sa duha ka sistema sa reaksyon, likido nga reaksyon nga mix ug lyophilized system mix.
1) Pag-andam sa liquid reaction mix
| Component | Tomo |
| Loop-mediated Amplification Buffer (uban ang tina) | 10 μL |
| Pagsagol sa RT-Enzymes | 2.8 μl |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Mga template sa DNA/RNA b | × μL |
| Tubig nga walay Nuclease | Hangtod sa 50 μL |
2) Lyophilization system mix
① Pag-andam og lyophilized mix
| Component | Tomo |
| Loop-mediated Amplification Buffer (uban ang tina) | 10 μL |
| Lyophilized nga tigpanalipod | 20 μL |
| Pagsagol sa RT-Enzymes | 2.8 μl |
| Tubig nga walay Nuclease | Hangtod sa 50 μL |
② Lyophilization: Ang giandam nga Mix gi-lyophilize sa 50μL nga sistema
③ Pag-andam sa sagol nga reaksyon
| Component | Tomo |
| Lyophilized nga mix | 1 ka piraso |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Mga template sa DNA/RNA b | × μL |
| Tubig nga walay Nuclease | Hangtod sa 50 μL |
Mubo nga sulat:
1) a.10×Primer Mix : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.Ang DEPC (matunaw sa tubig) girekomendar alang sa nucleic acid templ.
1.I-incubate sa 65°C sulod sa 30-45mins, nga mahimong i-extend sa tukmang paagi sumala sa kausaban sa kolor Panahon sa reaksyon.
2.Sumala sa hubo nga mata, yellow ang positibo ug pula ang negatibo.
Mga nota
1.Ang asin mahimong makita sa ilawom sa buffer tube, vortex sa makadiyot o balit-ad nga mga tubo sa makadaghang higayon aron maayo ang pagsagol sa temperatura sa lawak.
2.Ang temperatura sa reaksyon mahimong ma-optimize tali sa 62 ℃ ug 68 ℃ sumala sa kahimtang sa mga primer.
3.Ang giputos nga mga reagents kinahanglan dili ibutyag sa hangin sa dugay nga panahon.
4.Ang red ug yellow discoloration reaction depende sa pH change sa reaction system, palihug ayaw gamita ang adunay sulod nga Tris nucleic acid storage solution, girekomendar nga gamiton ang ddH2O gitipigan nga nucleic acid;
5.Kinahanglan nga i-standardize ang eksperimento, lakip ang pag-andam sa sistema sa reaksyon, lyophilization, ug pagproseso sa sample ug proseso sa pagdugang sa sample;
6.Aron malikayan ang kontaminasyon, girekomenda nga andamon ang sistema sa reaksyon sa usa ka ultra-limpyo nga bangko, sa ubang mga Add templates sa fume hood sa kwarto aron malikayan ang sayup nga positibo nga pagpanghilabot.
