Mainit nga Pagsugod Bst 2.0 DNA Polymerase (walay gliserol)
Ang Bst DNA polymerase V2 nakuha gikan sa Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, nga adunay 5′→3′ DNA polymerase activity ug lig-on nga chain replacement activity, apan walay 5′→3′ exonuclease activity.Ang Bst DNA Polymerase V2 angayan alang sa strand-displacement, isothermal amplification LAMP (Loop mediated isothermal amplification) ug paspas nga pagkasunodsunod.Ang Bst DNA polymerase V2 usa ka mainit nga pagsugod nga bersyon nga gibase sa Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) nga nakuha pinaagi sa pagbag-o nga teknolohiya sa pagbag-o, nga makapugong sa kalihokan sa DNA polymerase sa temperatura sa kwarto, aron ang sistema sa reaksyon mahimong maoperahan ug maporma sa temperatura sa kwarto aron malikayan ang dili -specific amplification ug pagpalambo sa reaksyon efficiency, ug kini nga bersyon mahimong lyophilized.Dugang pa, ang kalihokan niini gipagawas sa taas nga temperatura, mao nga wala’y kinahanglan alang sa usa ka lahi nga lakang sa pagpaaktibo.
Mga sangkap
| Component | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymerase V2 (Glycerol-free)(8U/μL) | 0.2 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 2 × 10 mL |
Mga aplikasyon
1.LAMP isothermal amplification
2.DNA strand single displacement reaction
3.Taas nga GC gene sequencing
4.Pagsunud sa DNA sa lebel sa nanogram.
Kondisyon sa Pagtipig
Transportasyon ubos sa 0°C ug tipigan sa -25°C~-15°C.
Kahubitan sa Yunit
Ang usa ka yunit gihubit ingong ang gidaghanon sa enzyme nga nag-apil sa 25 nmol sa dNTP ngadto sa acid insoluble nga materyal sulod sa 30 minutos sa 65°C.
Pagkontrol sa Kalidad
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Ang kaputli sa Bst DNA polymerase V2 kay ≥99% gitino sa SDS-PAGE analysis gamit ang Coomassie Blue detection.
2.EndonucleaseKalihokan:Ang pagkubkob sa usa ka 50 μL nga reaksyon nga adunay minimum nga 8 U sa Bst DNA polymerase V2 nga adunay 1 μg λDNA sulod sa 16 ka oras sa 37 ℃ moresulta sa walay mamatikdan nga degradasyon sumala sa gitino.
3.Kalihokan sa Exonuclease:Ang pagkubkob sa usa ka 50 μL nga reaksyon nga adunay labing gamay nga 8 U sa Bst DNA polymerase V2 nga adunay 1 μg λ -Hind Ⅲ nga paghilis sa DNA sulod sa 16 ka oras sa 37 ℃ moresulta sa walay makit-an nga pagkadaut ingon nga gitino.
4.Nickase nga Kalihokan:Ang pagkubkob sa usa ka 50 μL nga reaksyon nga adunay labing gamay nga 8 U sa Bst DNA polymerase V2 nga adunay 1 μg pBR322 DNA sulod sa 16 ka oras sa 37 ° C nga wala’y makit-an nga pagkadaot sama sa gitino.
5.Kalihokan sa RNase:Ang pagkubkob sa usa ka 50 μL nga reaksyon nga adunay labing gamay nga 8 U sa Bst DNA polymerase V2 nga adunay 1.6 μg MS2 RNA sulod sa 16 ka oras sa 37 ° C nga mga resulta nga wala’y makit-an nga pagkadaot sama sa gitino.
6.E. coliDNA:Ang 120 U sa Bst DNA polymerase V2 gisusi alang sa presensya sa E. coli genomic DNA gamit ang TaqMan qPCR nga adunay mga primer nga espesipiko alang sa E. coli 16S rRNA locus.Ang E. coli genomic DNA kontaminasyon kay ≤1 Kopya.
LAMP Reaksyon
| Mga sangkap | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM matag usa) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Berde (25×)a | 1.0 μL |
| Pagsagol sa primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-free) (8 U/uL) | 1 μL |
| Template | × μL |
| ddH₂O | Hangtod sa 25 μL |
Mubo nga sulat:
1) a.SYTOTM 16 Berde (25×): Sumala sa eksperimento nga mga panginahanglan, ang ubang mga tina mahimong gamiton isip kapuli;
2) b.Primer mix: nakuha pinaagi sa pagsagol sa 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ug uban pang mga volume.
Reaksyon ug Kondisyon
1 × HC Bst V2 Buffer, ang temperatura sa paglumlum tali sa 60°C ug 65°C.
Pagka-Inactivation sa Kainit
80°C, 20min
