2×PCR Master Mix (walay Tina)
Ang PCR Master Mix kay usa ka klase sa conventional PCR premixed solution nga andam gamiton, apil ang Taq DNA Polymerase, dNTP mix MgCl2 ug optimized buffer.Atol sa reaksyon, ang primer ug template lamang ang mahimong idugang alang sa pagpadako, nga makapasayon pag-ayo sa mga lakang sa operasyon sa eksperimento.Kini nga produkto adunay maayo kaayo nga mga stabilizer ug mahimong tipigan sulod sa 3 ka bulan sa 4 ℃.Ang produkto sa PCR adunay 3′-dA protrusion ug dali nga ma-clone sa T vector.
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Ang produkto kinahanglan nga gitipigan sa -25 ℃ ~ -15 ℃ sulod sa duha ka tuig.
Mga detalye
| Pagkamatinud-anon (vs.Taq) | 1 × |
| Init nga Pagsugod | No |
| Overhang | 3′-A |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Format sa Reaksyon | SuperMix o Master Mix |
| Bilis sa Reaksyon | Estandard |
| Uri sa Produkto | PCR Master Mix (2×) |
Mga instruksyon
1.Sistema sa Reaksyon
| Mga sangkap | Gidak-on (μL) |
| Template DNA | Angay |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | Sa 50 |
2.Amplification Protocol
| Mga lakang sa siklo | Temperatura (°C) | Panahon | Mga siklo |
| Pre-denaturasyon | 94 ℃ | 5mins | 1 |
| Denaturasyon | 94 ℃ | 30 ka seg | 35 |
| Pag-ani | 50-60 ℃ | 30 ka seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30-60sec/kb | |
| Katapusan nga Extension | 72 ℃ | 10 min | 1 |
Mubo nga sulat:
1) Paggamit sa template: 50-200 nga genomic DNA;0.1-10 nga plasmid DNA.
2) Mg2+konsentrasyon: Kini nga produkto adunay 3 mM sa MgCl2 nga angay alang sa kadaghanan sa mga reaksyon sa PCR.
3) Temperatura sa pag-ani: Palihug tan-awa ang teoretikal nga Tm nga kantidad sa mga Primer.Ang temperatura sa annealing mahimong ibutang sa 2-5 ℃ nga mas ubos kaysa sa teoretikal nga kantidad sa primer.
4) Panahon sa pagpalawig: Alang sa pag-ila sa molekula, girekomenda ang 30 sec/kb.Para sa gene cloning, 60sec/kb girekomendar.
Mga nota
1.Para sa imong kaluwasan ug panglawas, palihog pagsul-ob ug lab coat ug disposable gloves para sa operasyon.
2.Alang lamang sa paggamit sa panukiduki!
