CHO HCP ELISA Kit
Usa ka One-step immunosorbent ELISA nga pamaagi ang gigamit niini nga assay.Ang mga sample nga adunay CHOK1 HCP dungan nga mo-react sa HRP-labeled goat anti-CHOK1 antibody ug anti-CHOK1 antibody nga gisapot sa ELISA plate, sa kataposan nahimong sandwich complex sa solid-phase antibody-HCP-labeled antibody.Ang unbound antigen-antibody mahimong matangtang pinaagi sa paghugas sa ELISA plate.Ang TMB substrate gidugang sa atabay alang sa igo nga reaksyon.Ang pag-uswag sa kolor gipahunong human sa pagdugang sa stop solution, ug ang OD o absorbance value sa reaksyon nga solusyon sa 450/650nm gibasa gamit ang microplate reader.Ang OD value o absorbance value kay proporsyonal sa HCP content sa solusyon.Gikan niini, ang konsentrasyon sa HCP sa solusyon mahimong kalkulado sumala sa standard curve.
Aplikasyon
Kini nga kit gigamit sa quantitatively detection sa sulod sa CHOK1 host cell protina residues sa samples.
Cmga omponent
S/N | Component | Konsentrasyon | Mga Kondisyon sa Pagtipig |
1 | CHOK1 HCP Standard | 0.5mg/mL | ≤–20 ℃ |
2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20 ℃, panalipdan gikan sa kahayag |
3 | TMB | NA | 2-8 ℃, pagpanalipod gikan sa kahayag |
4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
5 | Hunong solusyon | NA | RT |
6 | Microplate sealers | NA | RT |
7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
8 | Taas nga adsorption pre-coating Plates | NA | 2-8 ℃ |
Kagamitan Gikinahanglan
Mga Consumable / Kagamitan | Paggama | Katalogo |
Microplate nga magbabasa | Molecular Devices | Spectra Max M5, M5e, o katumbas |
Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, o katumbas |
Vortex mixer | IKA | MS3 Digital, o katumbas |
Pagtipig ug kalig-on
1.Transport sa -25~-15°C.
2.Ang mga kondisyon sa pagtipig sama sa gipakita sa Talaan 1;Ang mga sangkap 1-2 gitipigan ≤–20°C, 5-6 gitipigan RT,3,4,7,8 gitipigan sa 2-8 ℃;ang validity period kay 12 ka bulan.
Mga parameter sa produkto
1.Pagkasensitibo: 1ng/mL
2.Detection range: 3- 100ng/mL
3.Katukma: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.Sakup sa HCP:> 80%
5.Espesipiko: Kini nga kit kay unibersal kay kini espesipikong motubag sa CHOK1 HCP nga independente sa proseso sa pagputli.
Pag-andam sa reagent
1.PBST 0.05%
Dad-a ang 15 ml sa 20×PBST 0.05%, lasaw sa ddH2O, ug gihimo hangtod sa 300 ml.
2.1.0% BSA
Kuhaa ang 1g sa BSA gikan sa botelya ug lasaw sa 100 ml nga PBST 0.05%, isagol og maayo hangtod hingpit nga matunaw, ug tipigi sa 2-8°C.Ang giandam nga dilution buffer balido sulod sa 7 ka adlaw.Kini girekomendar sa pag-andam kon gikinahanglan.
3.Detection nga solusyon 2μg/mL
Dad-a ang 48μL sa 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP ug dilute sa 11,952μL sa 1% BSA aron makakuha og katapusang konsentrasyon sa 2μg/mL detection solution.
4.QC ug Pag-andam sa CHOK1 HCP Standards
tubo Dili. | Orihinal | Konsentrasyon | Tomo | 1% BSA | kinatibuk-ang Volume | Katapusan |
A | Estandard | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Talaan: Pagpangandam sa QC ug mga Sumbanan
Pamaagi sa Pagsusi
1.Pag-andam sa mga reagents sama sa gipakita sa "Reagent Preparation" sa ibabaw.
2.Dad-a ang 50μL sa mga sumbanan, sample ug QCs (tan-awa ang Table 3) sa matag atabay, dayon idugang ang 100μL nga Detection solution (2μg/mL);Tabuni ang plato gamit ang sealer, ug ibutang ang ELISA plate sa thermomixer.Paglumlom sa 500rpm, 25±3 ℃ sulod sa 2 ka oras.
3.Balita ang microplate sa lababo ug ilabay ang coating solution.Pipette ang 300μL sa PBST 0.05% sa matag atabay aron mahugasan ang plato sa ELISA ug ilabay ang solusyon, ug balika ang paghugas sa 3 ka beses.Balita ang plato sa usa ka limpyo nga papel nga tualya ug pamala.
4.Idugang ang 100μL sa TMB substrate (tan-awa ang Talaan 1) sa matag atabay, selyohan ang plato sa ELISA, ug ilumlom sa ngitngit sa 25±3 ℃ sulod sa 15 min.
5.Pipette og 100μL nga stop solution sa matag atabay.
6.Sukda ang pagsuyop sa wavelength nga 450/650nm gamit ang microplate reader.
7.Analisaha ang datos pinaagi sa SoftMax o katumbas nga software.I-plot ang standard curve pinaagi sa paggamit sa upat ka parameter nga logistic regression model.
Ehemplo sa Standard Curve
PAHINUMDOM: Kung ang konsentrasyon sa HCP sa sample molapas sa taas nga limitasyon sa standard curve, kini kinahanglan nga husto nga lasaw sa dilution buffer sa dili pa pagsulay.
NOTA
Ang hunong nga solusyon mao ang 2M sulfuric acid, palihug kuptan pag-ayo aron malikayan ang pagsabwag!