Mouse Genotyping Kit

Iring Numero: HCR2021A

Kini nga produkto usa ka kit nga gidisenyo alang sa paspas nga pag-ila sa mga genotype sa mouse, lakip ang DNA crude extraction ug PCR amplification system.Ang produkto mahimong gamiton alang sa PCR amplification direkta gikan sa ikog sa mouse, dalunggan, tudlo sa tiil ug uban pang mga tisyu human sa yano nga cleavage pinaagi sa Lysis Buffer ug Proteinase k.Walay overnight digestion, phenol-chloroform extraction o column purification, nga yano ug mupamubo sa panahon nga nahurot sa mga eksperimento.Ang produkto angay alang sa pagpadako sa target nga mga tipik hangtod sa 2kb ug multiplex nga mga reaksyon sa PCR nga adunay hangtod sa 3 nga mga parisan sa mga primer.Ang 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix naglangkob sa genetically engineered DNA polymerase, Mg²⁺, dNTPs ug usa ka optimized buffer system aron makahatag og taas nga amplification efficiency ug inhibitor tolerance, aron ang mga reaksyon sa PCR mahimo pinaagi sa pagdugang sa template ug primers ug pag-rehydrate sa produkto ngadto sa 1×.Ang produkto sa PCR nga gipadako sa kini nga produkto adunay usa ka prominenteng "A" nga base sa 3′ nga tumoy ug mahimong magamit direkta alang sa pag-clone sa TA pagkahuman sa pagputli.

Mga sangkap

Mga Kondisyon sa Pagtipig

Ang mga produkto kinahanglan nga tipigan sa -25 ~ -15 ℃ sulod sa 2 ka tuig.Human sa pagtunaw, ang Lysis Buffer mahimong tipigan sa 2 ~ 8 ℃ alang sa hamubo nga panahon nga daghang paggamit, ug maayo nga isagol kung gamiton.

Aplikasyon

Kini nga produkto angay alang sa pagtuki sa mouse knockout, transgenic detection, genotyping ug uban pa.

Mga bahin

1.Yano nga operasyon: dili kinahanglan nga makuha ang genomic DNA;

2.Lapad nga aplikasyon: angay alang sa direkta nga pagpadako sa lainlaing mga tisyu sa mouse.

Mga instruksyon

1.Pagpagawas sa genomic DNA

1) Pag-andam sa lysate

Ang tissue lysate giandam sumala sa gidaghanon sa mga sample sa mouse nga lysed (tissue lysate kinahanglan nga andamon on-site sumala sa dosis ug sagol nga maayo alang sa paggamit), ug ang proporsyon sa mga reagents nga gikinahanglan alang sa usa ka sample mao ang mosunod:

2) Sample nga Pagpangandam ug Lysis

Girekomenda nga Paggamit sa Tissue

Pagkuha ug tukma nga gidaghanon sa mga sample sa tissue sa mouse sa limpyo nga centrifuge tubes, idugang ang 200μL nga presko nga tissue lysate sa matag centrifuge tube, vortex ug pag-uyog, dayon paglumlom sa 55 ℃ sulod sa 30mins, ug dayon init sa 98 ℃ sulod sa 3mins.

3) Centrifugation

Pag-uyog og maayo sa lysate ug centrifuge sa 12,000 rpm sulod sa 5mins.Ang supernatant mahimong gamiton isip template alang sa PCR amplification.Kung gikinahanglan ang template alang sa pagtipig, ibalhin ang supernatant sa lain nga sterile centrifuge tube ug ibutang sa -20 ℃ sulod sa 2 ka semana.

2.Pagpadako sa PCR

Kuhaa ang 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix gikan sa -20 ℃ ug tunawon sa yelo, isagol nga baliskad ug andama ang PCR reaction system sumala sa mosunod nga lamesa (operate sa yelo):

Mubo nga sulat:

a) Ang kantidad nga idugang kinahanglan dili molapas sa 1/10 sa sistema, ug kung daghan ang idugang, ang PCR amplification mahimong mapugngan.

Girekomenda nga mga Kondisyon sa PCR

Mubo nga sulat:

a) Temperatura sa Annealing: Uban sa paghisgot sa Tm nga bili sa primer, girekomendar nga ibutang ang annealing temperature sa mas gamay nga Tm value sa primer +3 ~ 5 ℃.

Kasagarang Problema ug Solusyon

1.Walay gipunting nga mga strips

1) Sobra nga lysis nga produkto.Pilia ang labing tukma nga kantidad sa template, kasagaran dili molapas sa 1/10 sa sistema;

2) Dako kaayo nga sample size.Dilute ang lysate 10 ka beses ug dayon padaghanon, o pakunhuran ang sample size ug re-lysis;

3) Ang mga sample sa tisyu dili presko.Kini girekomendar sa paggamit sa lab-as nga tissue sample;

4) Dili maayo nga kalidad sa primer.Gamita ang genomic DNA para sa amplification aron mapamatud-an ang kalidad sa primer ug ma-optimize ang primerong disenyo.

2.Dili piho nga pagpadako

1) Ang temperatura sa annealing ubos kaayo ug ang numero sa siklo taas kaayo.Dugangi ang annealing temperatura ug pagpakunhod sa gidaghanon sa mga cycle;

2) Taas kaayo ang konsentrasyon sa template.Bawasan ang gidaghanon sa template o dilute ang template 10 ka beses human sa amplification;

3) Dili maayo nga primer specificity.I-optimize ang primerong disenyo.

Mga nota

1.Aron malikayan ang kontaminasyon sa krus tali sa mga sample, daghang mga himan sa sampling kinahanglan nga andamon, ug ang nawong sa mga himan mahimong limpyohan sa 2% nga sodium hypochlorite solution o nucleic acid cleaner human sa matag sampling kung gikinahanglan ang balik-balik nga paggamit.

2.Girekomenda nga mogamit ug presko nga mga tisyu sa mouse, ug ang gidaghanon sa sampling kinahanglan dili kaayo dako aron malikayan nga maapektuhan ang mga resulta sa amplification.

3.Ang Lysis Buffer kinahanglan nga maglikay sa kanunay nga pag-freeze-thaw, ug mahimong tipigan sa 2 ~ 8 ℃ alang sa mubo nga termino nga daghang paggamit.Kung gitipigan sa ubos nga temperatura, ang ulan mahimong mahitabo, ug kinahanglan nga hingpit nga matunaw sa dili pa gamiton.

4.Ang PCR Mix kinahanglan nga maglikay sa kanunay nga freeze-thaw, ug mahimong tipigan sa 4 ℃ alang sa hamubo nga gibalikbalik nga paggamit.

5.Kini nga produkto alang lamang sa siyentipikong eksperimento nga panukiduki ug dili kinahanglan gamiton sa klinikal nga pagdayagnos o pagtambal.