Robusstart Taq DNA Polymerase
Ang Robustart Taq DNA Polymerase usa ka mainit nga pagsugod sa DNA polymerase.Kini nga produkto dili lamang mas maayo nga makapugong sa dili piho nga reaksyon tungod sa dili piho nga annealing sa mga primer o primer aggregation sa proseso sa pag-andam ug pagpadako sa PCR system.Busa, kini adunay maayo kaayo nga espesipiko ug mas epektibo alang sa pagpadako sa ubos nga konsentrasyon nga mga template, ug kini angay alang sa multiplexed PCR amplification reaksyon.Dugang pa, kini nga produkto adunay maayo kaayo nga paggamit, ug ang lig-on nga mga resulta sa pagpadako mahimong makuha sa lainlaing mga lahi sa mga reaksyon sa PCR.
Mga sangkap
1.5 U/μL nga Robustart Taq DNA polymerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ libre) (opsyonal)
3.25 mM MgCl2(kapilian)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ libre) walay dNTP ug Mg²+, palihug idugang ang dNTP ug MgCl2sa pag-andam sa sistema sa reaksyon.
Girekomenda nga mga Aplikasyon
1.Paspas nga amplification.
2.Daghang amplification.
3.Direkta nga pagpadako sa dugo, swab, ug uban pang mga sample.
4.Pagsusi sa mga sakit sa respiratoryo.
Kondisyon sa Pagtipig
-20°C alang sa taas nga termino nga pagtipig, kinahanglan nga sagol nga maayo sa dili pa gamiton, likayan ang kanunay nga pag-freeze-thaw.
*Kon ang ulan mahitabo human sa refrigeration, kini mao ang normal;girekomendar nga ibalanse sa temperatura sa lawak sa dili pa isagol ug gamiton.
Kahubitan sa Yunit
Ang usa ka aktibo nga yunit (U) gihubit ingon ang gidaghanon sa enzyme nga naglakip sa 10 nmol sa deoxyribonucleotide ngadto sa acid-insoluble nga materyal sa 74°C sulod sa 30mins gamit ang activated salmon sperm DNA isip template/primer.
Pagkontrol sa Kalidad
1.SDS-PAGE electrophoretic purity labaw pa kay sa 98%.
2.Pagkasensitibo sa pagpadako, pagkontrol sa batch-to-batch, kalig-on.
3.Walay exogenous nuclease nga kalihokan, walay exogenous endonuclease o exonuclease kontaminasyon
Mga instruksyon
Setup sa Reaksyon
Mga sangkap | Tomo (μL) | Katapusan nga Konsentrasyon |
10 × PCR Buffer II (Mg²+ libre)a | 5 | 1 × |
dNTPs (10mM matag dNTP) | 1 | 200 μM |
25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
Robusstart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
25 × Primer nga sagolb | 2 | 1 × |
Template | - | < 1 μg/reaksyon |
ddH2O | Sa 50 | - |
Mubo nga sulat:
1) a.Ang buffer walay dNTP ug Mg²+, palihog idugang ang mga dNTP ug MgCl2sa pag-andam sa sistema sa reaksyon.
2) b.Kung gigamit para sa qPCR/qRT-PCR, ang fluorescent probes kinahanglang idugang sa reaction system.Kasagaran, ang katapusang primer nga konsentrasyon sa 0.2 μM maghatag ug maayong resulta;kon ang reaksyon performance mao ang kabus, ang primer konsentrasyon mahimong adjust sa han-ay sa 0.2-1 μM.Ang probe konsentrasyon kasagaran optimized sa han-ay sa 0.1-0.3 μM.Ang mga eksperimento sa gradient sa konsentrasyon mahimong mahimo aron makit-an ang labing kaayo nga kombinasyon sa primer ug probe.
Thermal cycling protocol
Regular nga PCRproseso | |||
Lakang | Temperatura | Panahon | Mga siklo |
Pre-denaturasyon | 95 ℃ | 1-5 ka min | 1 |
Denaturasyon | 95 ℃ | 10-20 ka seg | 40-50 |
Pag-ani / Extension | 56-64 ℃ | 20-60 ka seg |
Paspas nga PCRproseso | |||
Lakang | Temperatura | Panahon | Mga siklo |
Pre-denaturasyon | 95 ℃ | 30 ka seg | 1 |
Denaturasyon | 95 ℃ | 1-5 ka seg | 40-45 |
Pag-ani / Extension | 56-64 ℃ | 5-20 ka seg |
Mga nota
1.Ang amplification rate sa paspas nga DNA polymerase kinahanglan dili moubos sa 1 kb/10 s.Ang pagtaas sa temperatura ug ang rate sa pagkahulog, ang mode sa pagkontrol sa temperatura ug ang kahusayan sa pagpadagan sa init sa lainlaing mga instrumento sa PCR magkalainlain, mao nga girekomenda nga ma-optimize ang labing maayo nga mga kondisyon sa reaksyon alang sa piho nga paspas nga instrumento sa PCR.
2.Ang sistema labi ka mapahiangay, nga adunay mas taas nga espesipiko ug pagkasensitibo.
3.Angayan nga gamiton isip high sensitivity PCR detection reagents, ug mahimong gamiton sa multiplex PCR amplification reactions.
4.5′→3′ polymerase nga kalihokan, 5′→3′ exonuclease nga kalihokan;walay 3′→5′ exonuclease nga kalihokan;walay proofreading function.
5.Angayan alang sa qualitative ug quantitative testing sa PCR ug RT-PCR.
6.Ang 3′ nga katapusan sa produkto sa PCR mao ang A, nga mahimong direkta nga ma-clone sa usa ka T vector.
7.Ang tulo-ka-lakang nga pamaagi girekomendar alang sa mga primer nga adunay ubos nga temperatura sa annealing o alang sa pagpadako sa mga tipik nga mas taas pa sa 200 bp.