Uracil DNA Glycosylase
Ang Uracil-DNA Glycosylase (UNG o UDG) usa ka recombinant nga clone sa E.coli nga adunay gibug-aton nga molekula nga 25 kDa.Gi-catalyze niini ang pagpagawas sa libre nga uracil gikan sa uracil nga adunay single-stranded ug double-stranded nga DNA, ug dili aktibo batok sa RNA, ug mahimong gamiton aron mapugngan ang kontaminasyon sa mga produkto sa PCR amplification.Ang prinsipyo sa aksyon gipasukad sa kamatuoran nga kung ang dUTP gipulihan sa dTTP sa reaksyon sa PCR ug usa ka produkto sa pagpadako sa PCR nga adunay mga base sa dU ang naporma, ang enzyme mahimo nga pilion nga mabuak ang glycosidic bond sa mga base sa U sa single-stranded ug double-stranded. DNA ug degrade ang produkto sa PCR amplification.
Girekomenda nga Aplikasyon
Pagpadako sa Paglikay sa Kontaminasyon
Kondisyon sa Pagtipig
-20°C alang sa taas nga termino nga pagtipig, kinahanglan nga sagol nga maayo sa dili pa gamiton, likayan ang kanunay nga pag-freeze-thaw.
Pagtipig buffer
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Kahubitan sa Yunit
Ang gidaghanon sa enzyme nga gikinahanglan sa pag-degrade sa 1µg sa single-stranded DNA nga adunay dU base sa 1 ka oras sa 37°C maoy 1 unit.
Pagkontrol sa Kalidad
1.SDS-PAGE electrophoretic purity labaw pa sa 98%
2.Pagkasensitibo sa pagpadako, pagkontrol sa batch-to-batch, kalig-on
3.Human ang 1U sa UNG gitambalan sa 50 ℃ sulod sa 2mins, ang template nga adunay U ubos sa 103 ka kopya kinahanglang bug-os nga madaot ug walay produkto sa pagpadako nga mahimo
4.Walay exogenous nuclease nga kalihokan
Mga instruksyon
| Mga sangkap | Volume (μL) | Katapusan nga konsentrasyon |
| 10 × PCR Buffer (walay dNTP, Mg²+libre) | 5 | 1 × |
| mga dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ilisan ang dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1 × |
| Template | - | <1μg/reaksyon |
| ddH₂O | Sa 50 | - |
Mubo nga sulat: a: Kung gigamit alang sa qPCR/qRT-PCR, ang fluorescent probe kinahanglan idugang sa sistema sa reaksyon.Kasagaran, ang usa ka katapusang primer nga konsentrasyon sa 0.2 μM makahatag ug maayong mga resulta;sa diha nga ang reaksyon performance mao ang kabus, ang primer konsentrasyon mahimong adjust sa han-ay sa 0.2-1 μM.Kasagaran, ang probe konsentrasyon mao ang optimized sa han-ay sa 0.1-0.3 μM.Ang mga eksperimento sa gradient sa konsentrasyon mahimong mahimo aron makit-an ang labing kaayo nga kombinasyon sa primer ug probe.
Mga nota
1.Ang enzyme sa UNG mahimong magamit aron makuha ang kontaminado nga mga produkto sa pagpadako sa dUTP gikan sa sistema sa reaksyon sa wala pa ang reaksyon sa pagpadako sa PCR, dayon aron malikayan ang mga sayup nga positibo nga mga sangputanan tungod sa kontaminasyon sa produkto.
2.Ang kamalaumon nga temperatura alang sa UNG enzyme nga gamiton sa anti-kontaminasyon nga reaksyon sa PCR kasagaran 50 ℃ sulod sa 2mins;ang inactivation nga kahimtang mao ang 95 ℃ alang sa 5mins.
3.Likayi ang kanunay nga freeze-thaw, ug ayaw i-expose sa dagkong mga pag-usab-usab sa temperatura.
4.Ang lainlaing mga gene nga mapadako adunay lainlaing kahusayan sa paggamit sa dUTP ug pagkasensitibo sa UNG enzyme, busa, kung ang paggamit sa sistema sa UNG nagdala sa pagkunhod sa pagkasensitibo sa detection, ang sistema sa reaksyon kinahanglan nga ayohon ug ma-optimize, kung kinahanglan nimo ang teknikal nga suporta, palihug kontaka among kompanya.
