Superstart qPCR Premix plus-UNG
Iring Numero: HCB5071E
Ang Superstart qPCR Premix plus-UNG usa ka espesyal nga reagent nga gidisenyo alang sa Real Time PCR qualitative ug quantitative nga mga reaksyon gamit ang probe-based detection, nga espesipikong gihimo alang sa mga proseso sa lyophilization.Naglangkob kini sa usa ka nobela nga hot-start nga enzyme nga Hotstart Taq plus (DG), nga adunay kalihokan sa Taq enzyme nga natakpan sa temperatura sa kwarto, nga epektibo nga nagpugong sa dili piho nga pagpadako nga gipahinabo sa primer nga dili piho nga annealing o primer dimer nga pagporma sa ilawom sa ubos nga kondisyon sa temperatura, sa ingon nagpauswag ang piho nga reaksyon sa amplification.Kini nga reagent naggamit sa usa ka optimized qPCR specific buffer ug UNG/dUTP anti-contamination system aron makab-ot ang paspas nga hot-starting, pag-ayo pag-ayo sa efficiency ug sensitivity sa qPCR reactions.Makakuha kini og maayo nga standard nga mga kurba sa usa ka halapad nga mga lugar sa quantitation ug tukma nga paghimo sa quantitation, epektibo nga mapugngan ang sayup nga positibo nga amplification tungod sa nahabilin nga mga produkto sa PCR o kontaminasyon sa aerosol.Kini nga reagent nahiuyon sa kadaghanan nga fluorescent quantitative PCR nga mga instrumento gikan sa mga tiggama sama sa Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ug Roche ug uban pa, ug nagpakita og maayo nga kalig-on sa lyophilized nga porma.
Reagent nga komposisyon
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+libre) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (opsyonal)
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Long-term nga pagtipig sa -20 ℃;mahimong tipigan sa 4 ℃ sulod sa 3 ka bulan.Mix maayo sa dili pa gamiton uglikayan ang balikbalik nga pagyelo ug pagtunaw.
Protocol sa Pagbisikleta
| Pamaagi | Temp. | Panahon | Siklo |
| panghilis | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Pag-aktibo sa polymerase | 95 ℃ | 1~5 min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10~20 ka s | 40-50 |
| Pag-ani ug Extension | 56~64 ℃ | 20~60 ka s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyPagpangandam sa tukog
|
Komposisyon |
25µL nga Tomo |
50µL nga gidaghanon |
Katapusan nga Konsentrasyon |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+libre) (DG) | 5µL | 10µL | 1 × |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4 × lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1 × |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Template DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Sa 25µL | Sa 50µL | —— |
1. Ang katapusan nga konsentrasyon sa 0.2μM alang sa mga primer kasagarang makahatag ug maayong resulta;kung ang pasundayag sa reaksyon dili maayo, i-adjust ang konsentrasyon sa primer sa sulud nga 0.2-1μM kung gikinahanglan.Ang konsentrasyon sa probe kasagarang na-optimize sulod sa han-ay sa 0.1-0.3μM pinaagi sa gradient nga mga eksperimento aron makit-an ang labing maayo nga mga kombinasyon.
2. Ang gidaghanon sa kopya sa target nga mga gene nga anaa sa lain-laing matang sa templates managlahi;kung gikinahanglan, ang gradient dilution mahimong ipahigayon aron mahibal-an ang kamalaumon nga kantidad sa pagdugang sa template.
3. Kini nga sistema mahimong lyophilized;kung gigamit sa mga kostumer kini nga sistema nga wala’y mga kinahanglanon sa pagyeyelo, ang 4 × lyoprotectant mahimong pilion nga idugang; kung adunay kinahanglan nga mga produkto nga gi-freeze, sa panahon sa pag-validate sa performance sa produkto sa liquid reagents, kinahanglan nga idugang ang 4 × lyoprotectant aron masiguro ang pagkamakanunayon sa mga sangkap sa lyophilized system ug mga epekto.
Sa diha nga ang sistema gigamitd para sa freeze-drying, andama ang sistema as mosunod:
| Komposisyon | 25µL Sistema sa Reaksyon |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+libre) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4 × lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Sa 18~20µL |
* Kung gikinahanglan ang ubang mga sistema para sa freeze-drying, palihog konsultaha og bulag.
Proseso sa Lyophilizationss
| Pamaagi | Temp. | Panahon | kahimtang | Pressure |
| Pre-freezing | 4 ℃ | 30 min | Hupti |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Pagpabugnaw | ||
| -50 ℃ | 180 min | Hupti | ||
| Panguna nga Pagpa-uga | -30 ℃ | 60 min | Pagpainit |
Katapusan nga Vacuum |
| -30 ℃ | 70 min | Hupti | ||
| Ikaduha nga Pagpa-uga | 25 ℃ | 60 min | Pagpainit |
Katapusan nga Vacuum |
| 25 ℃ | 300 min | Hupti |
2. Ang proseso sa lyophilization sa ibabaw alang lamang sa pakisayran.Ang lainlaing mga tipo sa produkto ug lainlaing mga freeze-dryer adunay lainlaing mga parameter, mao nga mahimo ang mga pag-adjust sumala sa aktwalkondisyon sa panahon sa paggamit.
3. Ang lain-laing mga proseso sa lyophilization mahimong angay alang sa lain-laing mga batch gidak-on sa lyophilizedmga produkto, busa igo nga pag-validate sa pagsulay ang kinahanglan himuon kung gigamit alang sa dinagkong produksiyon.
Panudlo alang sa paggamit sa lyophilized pulbos
1. Sa daklit nga centrifuge ang lyophilized powder;
2. Idugang ang nucleic acid template sa lyophilized powder ug idugang ang tubig hangtod sa 25µL;
3. Mix maayo pinaagi sa centrifugation ug modagan sa makina.
Pagkontrol sa kalidad:
1. Functional testing: sensitivity, specificity, reproducibility sa qPCR.
2. Walay exogenous nuclease nga kalihokan, walay exogenous endo/exonuclease kontaminasyon.
Teknikal nga Impormasyon:
1. Ang Superstart qPCR Premix plus-UNG naggamit sa usa ka nobela nga hot-start enzyme nga makapahimo sa paspas nga hot-starting sulod sa 1~5 minutos;pinaagi sa espesyal nga buffer pormulasyon kini angay alang sa multiplex fluorescent quantitative PCR reaksyon.
2. Kini adunay mas taas nga espesipiko nga kamahinungdanon pagpalambo sa pagkasensitibo sa fluorescence quantitative PCR limit detection, paghimo sa amplification curves normalization, fluorescence bili makakuha ug dayag nga kalamboan sa ubos nga konsentrasyon templates, angayan ingon nga taas nga sensitivity fluorescence quantitative PCR detection reagents.
3. Alang sa mga primer nga adunay ubos nga temperatura sa pag-anil o mas taas sa 200bp nga mga tipik, girekomenda ang 3-lakang nga pamaagi.
4. Ang utilization efficiency sa dUTP ug sensitivity sa UNG enzyme magkalahi alang sa lain-laing target genes, busa kung ang paggamit sa UNG system mosangpot sa pagkunhod sa detection sensitivity, ang reaction system kinahanglan nga i-adjust ug optimized.Kung gikinahanglan ang teknikal nga suporta palihug kontaka ang among kompanya.
5. Gamita ang gipahinungod nga mga lugar ug mga pipette sa wala pa ug pagkahuman sa pagpadako, pagsul-ob og gwantis sa panahon sa operasyon ug ilisan kini kanunay;ayaw ablihi ang reaction tube pagkahuman sa PCR aron mamenosan ang kontaminasyon sa mga sample sa mga produkto sa PCR.
