2×HiF Taq plus Master Mix
Iring Numero: HCR2014B
Ang HIF Taq plus Master Mix (With Dye) usa ka andam-gamiton nga 2×premixed nga solusyon nga adunay Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs, ug optimized buffer.Duha ka monoclonal antibodies sa temperatura sa kwarto nga nagpugong sa kalihokan sa polymerase ug 3′→5′exonuclease nga kalihokan gidugang sa master mix alang sa dali ug labi ka piho nga Hot Start PCR.Ang extension factor gidugang sa master mix aron mahatagan ang enzyme og taas nga fragment amplification capacity, ang gitas-on sa amplification mahimong hangtod sa 13 kb, ang enzyme adunay 5′→3′ DNA polymerase activity ug 3′→5′ exonuclease nga kalihokan, ang pagkamatinud-anon niini mao ang 83 ka pilo sa Taq DNA polymerase, nga 9 ka pilo sa ordinaryo nga DNA polymerase.Kini angay alang sa pagpadako sa komplikado nga mga template, ang produkto sa pagpadako usa ka blunt nga katapusan.
Ang 2×HIF Taq plus Master Mix(With Dye) adunay mga bentaha sa paspas ug sayon, taas nga pagkasensitibo, lig-on nga espesipiko, maayo nga kalig-on, ug uban pa, ang sistema sa reaksyon kinahanglan lamang nga makadugang sa mga primer ug templates, ug mahimong mapadako sa usa ka duha- lakang nga protocol, pagpayano sa mga lakang sa eksperimento ug pagdaginot sa oras.Kini nga produkto adunay sulud nga electrophoresis indicator dyes, ug ang mga produkto sa PCR mahimong magamit direkta alang sa electrophoresis.Dugang pa, ang produkto usab adunay usa ka piho nga ahente sa pagpanalipod, aron ang master mix makapadayon sa lig-on nga kalihokan pagkahuman sa gibalikbalik nga freeze-thaw.
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Ang mga produkto kinahanglan nga tipigan sa -25 ~ -15 ℃ sulod sa 1 ka tuig.
Mga detalye
| Detalye sa produkto | Master Mix |
| Konsentrasyon | 2× |
| Init nga Pagsugod | Gitukod-sa Hot Start |
| Overhang | Blunt |
| Katulin sa reaksyon | Paspas |
| Gidak-on (Katapusang Produkto) | Hangtod sa 13kb |
| Mga kondisyon alang sa transportasyon | Dry ice |
| matang sa produkto | High fidelity PCR premixes |
Mga instruksyon
1.Sistema sa Reaksyon sa PCR
| Mga sangkap | Volume (μL) |
| DNA Template | Angay |
| Sa unahan nga primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Balikbalik nga Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | ngadto sa 50 |
2.Girekomenda nga paggamit sa lainlaing mga template
| Uri sa template | Pagpadako sa mga tipik gikan sa 1kb hangtod sa 10 kb |
| Genomic nga DNA | 50ng-200 ng |
| Plasmid o Viral nga DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2.5 µL (Dili molapas sa 10% sa katapusang gidaghanon sa reaksyon sa PCR) |
3.Amplification Protocol
1) Duha ka Lakang nga Protocol (complexity template)
| lakang sa siklo | Temp. | Panahon | Mga siklo |
| Inisyal nga denaturation | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10 sec | 30-35 |
| Extension | 68 ℃ | 30 ka seg/kb | |
| Katapusan nga extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Tulo ka Lakang nga Protocol (regular nga protocol)
| lakang sa siklo | Temp. | Panahon | Mga siklo |
| Inisyal nga denaturation | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10 sec | 30-35 |
| Pag-ani | 60 ℃ | 20 ka seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30 ka seg/kb | |
| Katapusan nga extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (complexity template)
| lakang sa siklo | Temperatura | Panahon | Mga siklo |
| Inisyal nga denaturation | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10 ka seg | 15 (1 ℃ pagkunhod kada siklo) |
| Gradient annealing | 70-55 ℃ | 20 ka seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30 ka seg/kb | |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10 ka seg |
20 |
| Pag-ani | 55 ℃ | 20 ka seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30 ka seg/kb | |
| Katapusan nga extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Mga bahin ubos sa lain-laing amplification protocol
| Protocol | Duha ka Lakang | Tulo ka lakang | Gradient annealing |
| Spec. | paspas | medium | hinay |
| Espesipiko | taas | medium | taas |
| PCR ani | medium | taas | medium |
| Rate sa pagkakita | taas | medium | taas |
Mga nota
Palihug pagsul-ob sa gikinahanglan nga PPE, ingon nga lab coat ug gwantes, aron masiguro ang imong kahimsog ug kaluwasan!
