DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
Iring No: HC4007A
Ang DNase I (Deoxyribonuclease I) maoy usa ka endodeoxyribonuclease nga makahilis sa usa o doble-stranded nga DNA.Kini nag-ila ug nagputol sa phosphodiester bonds aron makahimo og monodeoxynucleotides o single- o double-stranded oligodeoxynucleotides nga adunay phosphate nga mga grupo sa 5'-terminal ug hydroxyl sa 3'-terminal.Ang kalihokan sa DNase I nagdepende sa Ca2+ug mahimong activate sa divalent metal ions sama sa Mn2+ug Zn2+.5 mM Ca2+nanalipod sa enzyme gikan sa hydrolysis.Sa presensya ni Mg2+, ang enzyme makaila ug makaputol sa bisan unsang dapit sa bisan unsang strand sa DNA.Sa presensya ni Mn2+, ang double strands sa DNA mahimong dungan nga mailhan ug mapikas sa halos parehas nga site aron maporma ang flat end nga mga tipik sa DNA o sticky end nga mga tipik sa DNA nga adunay 1-2 nga nucleotides nga nagtuybo.
Mga sangkap
| Ngalan | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-free | 20μL | 200μL | 1mL | 10 mL |
| 10 × DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 mL |
Mga kahimtang sa pagtipig
-25 ℃ ~ -15 ℃ alang sa pagtipig;Pagdala sa ilawom sa mga pack sa yelo.
Mga instruksyon
1. Andama ang reaksyon nga solusyon sa RNase-free tube sumala sa mga proporsyon nga gilista sa ubos:
| Component | Tomo |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, RNase-free(5U/μL) | 1 U kada µg RNA① |
| ddH2O | Hangtod sa 10μL |
Mubo nga sulat: ①Kalkulahin ang gidaghanon sa DNase I nga kinahanglang idugang base sa gidaghanon sa RNA.
2. 37 ℃ sulod sa 15 minutos;
3. Idugang ang 0.5M EDTA sa katapusang konsentrasyon sa 2.5mM~5mM, ug init sa 65 ℃ sulod sa 10 minutos aron mahunong ang reaksyon.Ang sample mahimong direktang gamiton para sa sunod nga reaksyon sama sa reverse transcriptioneksperimento.
Kahubitan sa Yunit
Ang usa ka yunit gihubit ingon ang gidaghanon sa enzyme nga hingpit nga magpaubos sa 1µg sa pBR322DNA sa 10 minuto sa 37 ℃.
Pagkontrol sa Kalidad
RNase:Ang 5U sa DNase I nga adunay 1.6µg MS2 RNA sulod sa 4 ka oras sa 37 ℃ wala maghatag ug degradasyon kayGitino pinaagi sa agarose gel electrophoresis.
Mga nota
1. Palihug pag-andam sa 0.5MEDTA sa imong kaugalingon.
2. Gamita ang 1U DNase I kada µg sa RNA.Bisan pa, kung ang RNA dili moubos sa 1µg, palihug gamita ang 1U DNase I.
3. Palihug ibutang ang enzyme sa yelo sa panahon sa operasyon.
