Multiplex qPCR Probe Premix
Iring No: HCB5051A
Ang TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) usa ka pre-solution para sa 2 × real-time nga quantitative PCR amplification nga gihulagway sa taas nga pagkasensitibo ug espesipiko, nga asul ang kolor, ug adunay epekto sa sample nga pagdugang.Kini nga produkto kay usa ka 2× Mix pre-mixed reagent nga makahimo hangtod sa upat ka fluorescent quantitative PCR reactions sa usa ka reaction well.Kini nga produkto naglangkob sa genetically modified antibody nga pamaagi sa hot-start Taq enzyme, pag-ayo pag-ayo sa amplification sensitivity ug specificity.Sa parehas nga oras, kini nga produkto labi nga na-optimize ang multi-reaction buffer, nga makapauswag sa kahusayan sa pagpadako sa reaksyon ug mapauswag ang epektibo nga pagpadako sa mga template nga ubos ang konsentrasyon.Kini nga produkto mahimong gamiton alang sa genotyping ug multiplex quantitative analysis.
Espesipikasyon
| Init nga Pagsugod | Gitukod-sa init nga pagsugod |
| Pamaagi sa pagkakita | Deteksyon sa primer-probe |
| Pamaagi sa PCR | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Uri sa sample | DNA |
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Ang produkto gipadala uban ang uga nga yelo ug mahimong tipigan sa -25~-15 ℃ sulod sa 2 ka tuig.
Mga instruksyon
1. ReaksyonSistema
| Mga sangkap | Volume (μL) | Katapusan nga Konsentrasyon |
| 2 × TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1 × |
| Primer mix (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| Probe mix (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox reference nga tina | 0.5 | 1 × |
| Template DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | hangtod sa 25 | - |
Mubo nga sulat:Pagsagol pag-ayo sa dili pa gamiton aron malikayan ang sobra nga mga bula gikan sa kusog nga pag-uyog.
a.Primer nga konsentrasyon: Ang Primer Mix adunay daghang parisan sa mga primer, kasagaran ang matag primer sa katapusang konsentrasyon nga 0.2 μmol/L ug mahimo usab nga i-adjust tali sa 0.1 ug 0.5 μmol/L kon angay.
b.Konsentrasyon sa Probe: Ang Probe Mix adunay daghang mga probe nga adunay lainlaing mga signal sa fluorescence, ug ang konsentrasyon sa matag probe mahimong ma-adjust tali sa 50 ug 250 nmol/L sumala sa piho nga sitwasyon.
1.Rox dye reference: Gigamit kini sa Real Time PCR amplification instrument sama sa Applied Biosystems aron matul-id ang sayop sa fluorescence signal nga namugna tali sa mga atabay;kini nga produkto walay Rox dye reference.Girekomenda ang Cas#10200 kung gikinahanglan.
2.Pagtunaw sa template: sensitibo kaayo ang qPCR, ug girekomenda nga tunawon ang template aron magamit.Kung ang template usa ka cDNA stock solution, ang template volume kinahanglan dili molapas sa 1/10 sa kinatibuk-ang volume.
3.Sistema sa reaksyon: Ang 25μL, 30μL o 50 μL girekomendar aron maseguro ang pagka-epektibo ug pagkasubli sa target nga gene amplification.
4.Pag-andam sa sistema: Palihug pag-andam sa labing limpyo nga bangko, ug gamita ang mga tip ug mga tubo sa reaksyon nga wala’y nahabilin nga nuclease;girekomenda nga gamiton ang mga tip nga adunay mga cartridge sa filter.Likayi ang cross contamination ug aerosol contamination.
2.Programa sa reaksyon
| lakang sa siklo | Temp. | Panahon | Mga siklo |
| Inisyal nga denaturation | 95 ℃ | 5mins | 1 |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15 sec | 45 |
| Pag-ani/Pagdugang | 60 ℃ | 30 sec |
Mubo nga sulat:
1.Annealing/Extension: Ang temperatura ug oras mahimong tukma nga i-adjust sumala sa gidesinyo nga primer Tm value.
2.Pagkuha sa signal sa fluorescence: Ang oras sa pagkuha sa signal sa fluorescence nga gikinahanglan alang sa lainlaing mga instrumento sa pagtuki sa qPCR lahi, palihug itakda sumala sa minimum nga limitasyon sa oras.Ang oras sa daghang kasagarang mga instrumento gitakda ingon sa mosunod:
20 sec: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 segundos: Applied Biosystems 7300
32 segundos: Applied Biosystems 7500
Mga nota
Palihug pagsul-ob sa gikinahanglan nga PPE, ingon nga lab coat ug gwantes, aron masiguro ang imong kahimsog ug kaluwasan!
