Multiplex Usa ka Lakang RT-qPCR Premix-UNG
Cat No: HCB5145A
Ang Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) usa ka multiplex quantitative PCR kit nga gibase sa RNA isip template.Sa proseso sa eksperimento, ang reverse transcription ug quantitative PCR gihimo sa samang tubo, nga nagpayano sa eksperimento nga operasyon ug nagpamenos sa risgo sa kontaminasyon.Niini nga kit, ang unang strand nga cDNA episyente nga na-synthesize sa heat-resistant nga Reverse Transcriptase ug gidaghanon nga gipadako sa HotStart Tag DNA Polymerase.Ang kit nag-una nga adunay gi-optimize nga MP buffer, enzymes mix, ug uban pa. Ang buffer solution aduna nay Mg2+ug dNTP.Dugang pa, ang mga hinungdan nga epektibo nga makapugong sa dili piho nga pagpadako sa PCR ug pagpauswag sa kahusayan sa pagpadako sa daghang mga reaksyon sa qPCR gidugang, nga makasiguro sa pagkaayo sa pagpadako ug paghimo hangtod sa daghang reaksyon sa amplification.Ang sistema sa dUTP/UDG gidugang aron epektibong mapugngan ang risgo sa kontaminasyon sa aerosol.
Mga sangkap
1. Buffer
2. Pagsagol sa Enzyme
Espesipikasyon
| Init nga Pagsugod | Gitukod-sa init nga pagsugod |
| Pamaagi sa pagkakita | Deteksyon sa primer-probe |
| Pamaagi sa PCR | Usa ka lakang RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Uri sa sample | DNA |
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Ang produkto gipadala uban ang uga nga yelo ug mahimong tipigan sa -25~-15 ℃ sulod sa 1 ka tuig.Kinahanglang likayan ang kanunayfreeze-thaw.Kini girekomendar sa pagluwas sa gilain.
Mga instruksyon
1.Reaksyon Sistema
| Mga sangkap | Volume (μL) | Katapusan nga Konsentrasyon |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1 × |
| Pagsagol sa Enzyme | 1 | - |
| Primer/Probe mix (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Template RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | ngadto sa 25 | - |
Mubo nga sulat:
Siguruha nga maayo ang pagsagol sa dili pa gamiton, likayi ang sobra nga mga bula tungod sa kusog nga pagkurog.
a.Primer konsentrasyon: Primer mix lakip na ang multiplex primer, depende sa sitwasyon labing maayo nga primer konsentrasyon tingali sa taliwala sa 0.l ug 1.0μM.
b.Probe konsentrasyon: Probe mix lakip na ang multiplex probe labeling kalainan fluorescent grupo, depende sa sitwasyon labing maayo nga probe konsentrasyon tingali sa taliwala sa 0.05 ug 0.5μM.
c.Pagtunaw sa template: sensitibo kaayo ang qPCR ug girekomenda nga tunawon ang template.Ang kontrol nga Ct nga kantidad angay tali sa 20 ug 35.
d.Pag-andam sa sistema: Palihug pag-andam sa ultra limpyo nga working table, ug pipettor ug reaction tube nga walay nuclease residue;girekomenda nga gamiton ang ulo sa pusil nga adunay elemento sa pagsala.Likayi ang cross contamination ug aerosol contamination.
2. Na-optimize nga PagbisikletaProtokol
| Siklo lakang | Temp. | Panahon | Mga siklo |
| Balikbalik nga transkripsyon | 50 ℃a | 20 min | 1 |
| Inisyal nga denaturation | 95 ℃ | 5mins | 1 |
| Reaksyon sa amplification | 95 ℃ | 15 sec |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sec c |
Mubo nga sulat:
a.Balikbalik nga transkripsyon: Ang temperatura makapili sa 42°C o 50°C.
b.Pagpadako nga reaksyon: Ang temperatura gipasibo sumala sa Tm nga kantidad sa gidisenyo nga mga primer.
c.Pagkuha sa signal sa fluorescence: Palihog itakda ang eksperimento nga pamaagi sumala sa mga kinahanglanon sa manwal sa instrumento.
Mga nota
Palihug pagsul-ob sa gikinahanglan nga PPE, sama sa lab coat ug gwantes, aron masiguro ang imong kahimsog ug kaluwasan.
