Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Asul)

Iring Numero: HCB5041B

Ang Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) usa ka pre-solution para sa 2×real-time quantitative PCR amplification nga gihulagway sa taas nga sensitivity ug specificity, asul ang kolor, ug adunay epekto sa sample additional tracing.Ang kinauyokan nga sangkap nga Taq DNA polymerase naggamit sa antibody nga init nga pagsugod aron epektibo nga makapugong sa dili piho nga pagpadako tungod sa primer nga pag-annea sa panahon sa pag-andam sa sample.Sa parehas nga oras, ang pormula nagdugang sa mga hinungdan nga nagpasiugda aron mapaayo ang pagkaayo sa pagpadako sa reaksyon sa PCR ug pagbalanse sa pagpadako sa mga gene nga adunay lainlaing mga sulud sa GC (30 ~ 70%), aron ang quantitative PCR makakuha usa ka maayo nga linear nga relasyon sa usa ka halapad nga quantitative. rehiyon.Kini nga produkto adunay espesyal nga ROX Passive Reference Dye, nga magamit sa kadaghanan nga mga instrumento sa qPCR.Dili kinahanglan nga ayohon ang konsentrasyon sa ROX sa lainlaing mga instrumento.Kinahanglan lamang nga idugang ang mga primer ug templates aron maandam ang sistema sa reaksyon alang sa pagpadako.

Mga sangkap

Universal Blue qPCR Master Mix

Mga kahimtang sa pagtipig

Ang produkto gipadala nga adunay mga ice pack ug mahimong tipigan sa -25 ℃ ~ -15 ℃ sulod sa 18 ka bulan.Kinahanglan nga likayan ang kusog nga pag-irradiation sa kahayag kung magtipig o mag-andam sa sistema sa reaksyon.

Espesipikasyon

Mga instruksyon

1. Sistema sa Reaksyon

[Note]: Pagsagol pag-ayo sa dili pa gamiton aron malikayan ang sobra nga mga bula gikan sa kusog nga pag-uyog.

a) Primer nga konsentrasyon: Ang katapusan nga primer nga konsentrasyon mao ang 0.2μmol/L, ug mahimo usab nga adjust tali sa 0.1 ug 1.0μmol/L kon angay.

b) Konsentrasyon sa template: Kung ang template mao ang undiluted cDNA stock solution, ang volume nga gigamit kinahanglan dili molapas sa 1/10 sa kinatibuk-ang volume sa qPCR reaction.

c) Pagtunaw sa template: Girekomenda nga lasaw ang solusyon sa stock sa cDNA sa 5-10 ka beses.Ang labing maayo nga kantidad sa template nga gidugang mas maayo kung ang Ct nga kantidad nga nakuha pinaagi sa pagpadako mao ang 20-30 nga mga siklo.

d) Sistema sa reaksyon: Girekomenda nga gamiton ang 20μL o 50μL aron masiguro ang pagka-epektibo ug pagkasubli sa target nga pagpadako sa gene.

e) Pag-andam sa sistema: Palihug pag-andam sa labing limpyo nga bangko ug gamita ang mga tip ug mga tubo sa reaksyon nga wala’y nahabilin nga nuclease;girekomenda nga gamiton ang mga tip nga adunay mga cartridge sa filter.Likayi ang cross contamination ug aerosol contamination.

2.Programa sa reaksyon

Standard nga Programa

Dali nga Programa

[Pahinumdom]: Ang paspas nga programa haom alang sa kadaghanan sa mga gene, ug ang standard nga mga programa mahimong sulayan alang sa indibidwal nga komplikadong secondary structure nga mga gene.

a) Temperatura ug oras sa pag-ani: Palihug i-adjust sumala sa gitas-on sa primer ug target nga gene.

b) Fluorescence signal acquisition (★): Palihug itakda ang eksperimento nga pamaagi sumala sa mga kinahanglanon sa mga instruksyon sa paggamit sa instrumento.

c) Pagtunaw nga kurba: Ang instrumento nga default nga programa mahimong gamiton nga normal.

3. Pagtuki sa Resulta 

Usa ka minimum nga tulo ka biolohikal nga mga replika ang gikinahanglan alang sa quantitative nga mga eksperimento.Human sa reaksyon, ang amplification curve ug melting curve kinahanglang kumpirmahon.

3.1 Pagpadako nga kurba:

Ang standard amplification curve kay S-shaped.Ang quantitative analysis mao ang labing tukma kung ang Ct value mahulog sa taliwala sa 20 ug 30. Kung ang Ct value ubos pa sa 10, gikinahanglan nga lasaw ang template ug ipahigayon ang pagsulay pag-usab.Kung ang kantidad sa Ct tali sa 30-35, kinahanglan nga madugangan ang konsentrasyon sa template o ang gidaghanon sa sistema sa reaksyon, aron mapauswag ang kahusayan sa amplification ug masiguro ang katukma sa pag-analisar sa resulta.Kung ang kantidad sa Ct labaw pa sa 35, ang mga resulta sa pagsulay dili maka-analisar sa gidaghanon sa ekspresyon sa gene, apan mahimong magamit alang sa pagtuki sa kwalitatibo.

3.2 Kurba sa pagkatunaw:

Ang single peak sa melting curve nagpakita nga ang reaction specificity maayo ug quantitative analysis mahimong ipahigayon;kung ang curve sa pagtunaw nagpakita sa doble o daghang mga taluktok, dili mahimo ang pagtuki sa quantitative.Ang curve sa pagtunaw nagpakita sa doble nga mga taluktok, ug gikinahanglan ang paghukom kung ang dili target nga peak mao ang primer dimer o dili piho nga pagpadako sa DNA agarose gel electrophoresis.Kung kini usa ka primer dimer, girekomenda nga pakunhuran ang konsentrasyon sa primer o pagdesinyo pag-usab sa mga primer nga adunay taas nga kahusayan sa amplification.Kung kini dili piho nga pagpadako, palihug dugangi ang temperatura sa pag-anil, o pagdesinyo pag-usab sa mga primer nga adunay piho.

Mga nota

Palihug pagsul-ob sa gikinahanglan nga PPE, ingon nga lab coat ug gwantes, aron masiguro ang imong kahimsog ug kaluwasan！

Kini nga produkto alang lamang sa paggamit sa panukiduki!