Ihalas nga Taq DNA Polymerase
Ang Taq DNA Polymerase kay usa ka thermostable nga DNA polymerase gikan sa Thermus aquaticus YT-1, nga adunay 5′→3′ polymerase activity ug 5′ flap endonuclease activity.
Mga sangkap
| Component | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 mL | 2 × 10 mL | 2 × 50 mL | 5 × 200 mL |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 5 × 10 mL |
Kondisyon sa Pagtipig
Transportasyon ubos sa 0°C ug tipigan sa -25°C~-15°C.
Kahubitan sa Yunit
Ang usa ka yunit gihubit isip ang gidaghanon sa enzyme nga nag-apil sa 15 nmol sa dNTP ngadto sa acid insoluble nga materyal sulod sa 30 minutos sa 75°C.
Pagkontrol sa Kalidad
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Ang kaputli sa Taq DNA polymerase kay ≥95% nga gitino sa SDS-PAGE analysis.
2.Endonuclease nga Kalihokan:Ang minimum nga 5 U sa Taq DNA polymerase nga adunay 1 μg λDNA sulod sa 16 ka oras sa 37 ℃ moresulta sa walay mamatikdan nga degradasyon sumala sa gitino.
3.Kalihokan sa Exonuclease:Ang minimum nga 5 U sa Taq DNA polymerase nga adunay 1 μg λ -Hind Ⅲ digest DNA sulod sa 16 ka oras sa 37 ℃ moresulta sa walay mamatikdan nga degradasyon sumala sa gitino.
4.Nickase nga Kalihokan:Ang minimum nga 5 U sa Taq DNA polymerase nga adunay 1 μg pBR322 DNA sulod sa 16 ka oras sa 37°C moresulta sa walay mamatikdan nga degradasyon sumala sa gitino.
5.Kalihokan sa RNase:Ang minimum nga 5 U sa Taq DNA polymerase nga adunay 1.6 μg MS2 RNA sulod sa 16 ka oras sa 37°C moresulta sa walay mamatikdan nga degradasyon sumala sa gitino.
6.E. coliDNA:Ang 5 U sa Taq DNA polymerase gisusi alang sa presensya sa E. coli genomic DNA gamit ang TaqMan qPCR nga adunay mga primer nga espesipiko alang sa E. coli 16S rRNA locus.Ang E. coli genomic DNA kontaminasyon kay ≤1 Kopya.
7.PCR Amplification (5.0 kb Lambda DNA)- Usa ka 50 µL nga reaksyon nga adunay 5 ng Lambda DNA nga adunay 5 ka yunit sa Taq DNA Polymerase alang sa 25 nga mga siklo sa PCR amplification nagresulta sa gipaabut nga 5.0 kb nga produkto.
Setup sa Reaksyon
| Mga sangkap | Tomo |
| Template DNAa | kapilian |
| 10 μM Ipasa nga Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM matag usa) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb | 0.25 μL |
| Tubig nga walay nuclease | Hangtod sa 50 μL |
Mubo nga sulat:
1) Ang kamalaumon nga konsentrasyon sa reaksyon sa lainlaing mga template lahi.Ang mosunod nga talaan nagpakita sa girekomendar nga template nga paggamit sa 50 µL reaction system.
| DNA | kantidad |
| Genomic | 1 ng-1 ug |
| Plasmid o Viral | 1 pg-1 ng |
2) Ang labing maayo nga konsentrasyon sa Taq DNA Polymerase mahimong gikan sa 0.25 µL~1 µL sa mga espesyal nga aplikasyon.
ReaksyonPrograma
| Lakang | Temperatura(°C) | Panahon | Mga siklo |
| Inisyal nga denaturationa | 95 ℃ | 5mins | - |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 nga mga Siklo |
| Pag-anib | 60 ℃ | 15 s | |
| Extension | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Katapusan nga Extension | 72 ℃ | 5mins | - |
Mubo nga sulat:
1) Ang inisyal nga kondisyon sa denaturation angay alang sa kadaghanan nga mga reaksyon sa pagpadako ug mahimong usbon sumala sa pagkakomplikado sa istruktura sa template.Kung komplikado ang istruktura sa template, ang oras sa pre-denaturation mahimong madugangan sa 5 - 10mins aron mapauswag ang inisyal nga epekto sa denaturation.
2) Ang annealing temperatura kinahanglan nga adjust sumala sa Tm bili sa primer, nga sa kasagaran gibutang sa 3 ~ 5 ℃ ubos pa kay sa Tm bili sa primer;Alang sa mga komplikadong templates, gikinahanglan ang pag-adjust sa temperatura sa annealing ug pagpalugway sa oras sa extension aron makab-ot ang episyente nga amplification.
