Sensitibo sa Temperatura UNG
Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) kay nakuha pinaagi sa recombinant nga ekspresyon sa E. coli.Ang enzyme nag-catalyze sa pagpagawas sa libre nga uracil gikan sa uracil nga adunay single ug double-stranded nga DNA ug dili aktibo batok sa RNA.Kung itandi sa naandan nga UNG enzyme sa E. coli gene nga gigikanan, ang TS-UNG enzyme adunay mas taas nga kalihokan sa mubu nga temperatura (20 ℃ ~ 37 ℃) ug sensitibo sa temperatura ug dali nga dili aktibo (50 ℃), paglikay sa pagkadaot sa pagpadako nga adunay sulud nga dUTP. mga produkto sa temperatura sa lawak pinaagi sa nahabilin nga kalihokan nga mahimong magpabilin human sa dili aktibo sa conventional UNG enzyme.Busa, ang TS-UNG enzyme dili lamang angay alang sa PCR contamination prevention reaction, apan maayo usab nga mohaum sa RT-PCR amplification program ug magamit sa RT-PCR contamination prevention reaction.
Girekomenda nga Aplikasyon
Pagpadako sa Paglikay sa Kontaminasyon
Kondisyon sa Pagtipig
-20°C alang sa taas nga termino nga pagtipig, kinahanglan nga sagol nga maayo sa dili pa gamiton, likayan ang kanunay nga pag-freeze-thaw.
Pagtipig buffer
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Kahubitan sa Yunit
Ang gidaghanon sa enzyme nga gikinahanglan sa pag-degrade sa 1µg sa single-stranded DNA nga adunay dU base sa 1 ka oras sa 37°C maoy 1 unit of activity (U).
Pagkontrol sa Kalidad
1.SDS-PAGE electrophoretic purity labaw pa sa 98%
2.Kalihokan sa pagkadaot, pagkontrol sa batch-to-batch, kalig-on
3.Walay exogenous nuclease nga kalihokan, walay exogenous endonuclease o exonuclease kontaminasyon.
Mga instruksyon
| Mga sangkap | Volume (μL) | Katapusan nga konsentrasyon |
| 10 × PCR Buffer (walay dNTP, Mg²+libre) | 5 | 1 × |
| mga dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ilisan ang dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1 × |
| Template | - | <1μg/reaksyon |
| ddH₂O | Sa 50 | - |
Mubo nga sulat: a: Kung gigamit alang sa qPCR/qRT-PCR, ang fluorescent probe kinahanglan idugang sa sistema sa reaksyon.Kasagaran, ang usa ka katapusang primer nga konsentrasyon sa 0.2 μM makahatag ug maayong mga resulta;sa diha nga ang reaksyon performance mao ang kabus, ang primer konsentrasyon mahimong adjust sa han-ay sa 0.2-1 μM.Kasagaran, ang probe konsentrasyon mao ang optimized sa han-ay sa 0.1-0.3 μM.Ang mga eksperimento sa gradient sa konsentrasyon mahimong mahimo aron makit-an ang labing kaayo nga kombinasyon sa primer ug probe.
Mga nota
1.Ang kamalaumon nga temperatura sa reaksyon sa TS-UNG enzyme medyo ubos, ug kini mahimong ma-optimize sa han-ay sa 20 ℃ ~ 37 ℃, ang dosis sa enzyme ug ang oras sa reaksyon mahimong ma-optimize sa han-ay sa 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;ug ang enzyme mahimong dili aktibo sa proseso sa reverse transcription.
2.Kini angay alang sa PCR ug RT-PCR aron malikayan ang kontaminasyon.
3.Likayi ang kanunay nga freeze-thaw, ug ayaw i-expose sa dagkong mga pag-usab-usab sa temperatura.
4.Ang lainlaing mga gene nga mapadako adunay lainlaing kahusayan sa paggamit sa dUTP ug pagkasensitibo sa UNG enzyme, busa, kung ang paggamit sa sistema sa UNG nagdala sa pagkunhod sa pagkasensitibo sa detection, ang sistema sa reaksyon kinahanglan nga ayohon ug ma-optimize, kung kinahanglan nimo ang teknikal nga suporta, palihug kontaka among kompanya.
