UDG/UNG Enzymes
Ang UDG(uracil DNA glycosylase) maka-catalyze sa hydrolysis sa N-glycosidic link tali sa base sa uracil ug sa sugar-phosphate nga backbone sa ssDNA ug dsDNA.Kini dali nga makontrol ang polusyon sa aerosol ug angay alang sa kasagaran nga mga sistema sa biology sa molekula sama sa PCR, qPCR, RT-qPCR ug LAMP.
Mga detalye
| Expression Host | Recombinant E. coli uban sa uracil DNA glycosylase gene |
| Molekular nga Timbang | 24. 8kDa |
| Kaputli | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Pagka-Inactivation sa Kainit | 95℃, 5~10 min |
| Kahubitan sa Yunit | Ang usa ka yunit (U) gihubit ingon ang gidaghanon sa enzyme nga gikinahanglan aron ma-catalyze ang hydrolysis sa l μg dU nga adunay dsDNA sa 30 minuto sa 25 ℃. |
Pagtipig
Ang produkto kinahanglan nga gitipigan sa-25 ℃ ~ -15 ° C sulod sa duha ka tuig.
Mga instruksyon
1.Pag-andam sa PCR reaction mixture sumala sa mosunod nga sistema
| Mga sangkap | Volume (μL) | Katapusan nga konsentrasyon |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1 × |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/leach |
| Template DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Hangtod sa 50 | - |
Mubo nga sulat: Sumala sa mga kinahanglanon sa eksperimento, ang katapusan nga konsentrasyon sa dUTP mahimong ipasibo tali sa 0.2-0.6 mmol/L, ug 0.2 mmol/L dTTP mahimong mapili nga pilion.
2.Pamaagi sa amplification
| lakang sa siklo | Temperatura | Panahon | Mga siklo |
| pagkadaot sa template nga adunay dU | 25 ℃ | 10 min | 1 |
| UDG pagpaaktibo, template inisyal nga denaturation | 95 ℃ | 5~10mins | 1 |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 10 ka seg |
30-35 |
| Pag-ani | 60 ℃ | 20 ka seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
| Katapusan nga extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Mubo nga sulat: Ang oras sa reaksyon sa 25 ° C mahimong ipasibo sa sulod sa 5-10mins sumala sa mga kinahanglanon sa eksperimento.
Mga nota
1.Aktibo ang UDG sa kadaghanan sa mga buffer sa reaksyon sa PCR.
2.Ang mga enzyme kinahanglan nga tipigan sa usa ka icebox o sa usa ka ice bath kon gamiton, ug kinahanglan nga tipigan sa-20°C diha-diha dayon human sa paggamit.
3.Palihug pagsul-ob sa gikinahanglan nga PPE, ingon nga lab coat ug gwantes, aron masiguro ang imong kahimsog ug kaluwasan!
