Rnase Inhibitor
Ang Murine RNase inhibitor usa ka recombinant murine RNase inhibitor nga gipahayag ug giputli gikan sa E.coli.Kini nagbugkos sa RNase A, B o C sa usa ka ratio nga 1: 1 pinaagi sa non-covalent bonding, sa ingon nagpugong sa kalihokan sa tulo ka mga enzyme ug nanalipod sa RNA gikan sa pagkadaut.Bisan pa, dili kini epektibo batok sa RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H o RNase gikan sa Aspergillus.Ang Murine RNase inhibitor gisulayan sa RT-PCR, RT-qPCR ug IVT mRNA, ug nahiuyon sa lainlaing komersyal nga Reverse transcriptases, DNA polymerases ug RNA polymerases.
Kung itandi sa mga inhibitor sa RNase sa tawo, ang murine RNase inhibitor wala’y duha nga mga cysteine nga sensitibo kaayo sa oksihenasyon nga hinungdan sa dili aktibo nga inhibitor.Nga naghimo niini nga lig-on sa ubos nga konsentrasyon sa DTT (ubos sa 1 mM).Kini nga bahin naghimo niini nga angayan gamiton sa mga reaksyon diin ang taas nga konsentrasyon sa DTT dili maayo sa reaksyon (eg Real-time nga RT-PCR).
Application
Kini nga produkto mahimong kaylap nga gigamit sa bisan unsang eksperimento diin ang pagpanghilabot sa RNase posible aron malikayan ang pagkadaot sa RNA, sama sa:
1.Synthesis sa unang strand sa cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Gipanalipdan ang RNA gikan sa pagkadaot sa panahon sa in vitro transcription/translation (pananglitan, in vitro viral replication system).
3.Pagdili sa kalihokan sa RNase sa panahon sa pagbulag ug pagputli sa RNA.
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Ang produkto mahimong tipigan sa -25～- 15 ℃, balido sulod sa 2 ka tuig.
Pagtipig buffer
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ug 50% glycerol.
Kahubitan sa yunit
Ang kantidad sa murine RNase inhibitor nga gikinahanglan sa pagpugong sa kalihokan sa 5ng sa ribonuclease A sa 50% gihubit ingon nga usa ka yunit (U).
Molekular nga gibug-aton sa protina
Ang gibug-aton sa molekula sa murine RNase inhibitor mao ang 50 kDa.
Pagkontrol sa kalidad
Exonuclease Kalihokan:
Ang 40 U sa murine RNase inhibitor nga adunay 1 μg λ -Hind III nga paghilis sa DNA sa 37 ℃ sulod sa 16 ka oras dili makahatag og degradasyon nga gitino sa agarose gel electrophoresis.
Kalihokan sa Endonuclease:
Ang 40 U sa murine RNase inhibitor nga adunay 1μg λ DNA sa 37 ℃ sulod sa 16 ka oras dili makahatag ug degradasyon nga gitino sa agarose gel electrophoresis.
Nicking Kalihokan:
Ang 40U sa murine RNase inhibitor nga adunay 1μg pBR322 sa 37 ℃ sulod sa 16 ka oras wala maghatag ug degradasyon nga gitino sa agarose gel electrophoresis.
RNase Kalihokan:
Ang 40U sa murine RNase inhibitor nga adunay 1.6μg MS2 RNA alang sa 4h sa 37 ℃ wala maghatag ug degradasyon nga gitino sa agarose gel electrophoresis.
E.coli DNA:
Ang 40 U sa murine RNase inhibitor gisusi alang sa presensya sa E. coli genomic DNA gamit ang TaqMan qPCR nga adunay mga primer nga espesipiko alang sa E. coli 16S rRNA locus.Ang E. coli genomic DNA kontaminasyon kay ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1. Ang mapintas nga oscillation o stirring mosangpot sa enzyme inactivation.
2. Ang labing taas nga temperatura range niini nga inhibitor mao ang 25-55 ℃ , ug Kini gi-inactivate sa 65 ℃ ug sa ibabaw.
3. Ang mga kalihokan sa RNase H, RNase 1 ug RNase T1 wala gipugngan sa murine RNase inhibitor.
4. Ang pagdili sa kalihokan sa RNase nakit-an sa usa ka halapad nga pH (pH 5-9 tanan aktibo), ug ang labing taas nga kalihokan naobserbahan sa pH 7-8.
5. Tungod kay ang ribonucleases kasagarang magpabilin nga kalihokan ubos sa denaturing nga mga kondisyon, pag-amping kinahanglan nga himoon aron malikayan ang denaturing RNase Inhibitor nga mga molekula nga nagkomplikado sa usa ka ribonuclease.Aron mapugngan ang pagpagawas sa aktibo nga ribonuclease, ang temperatura nga labaw sa 50 °C ug taas nga konsentrasyon sa urea o uban pang mga denaturing agent kinahanglan likayan.
