Proteinase K NGS (pulbos)
Iring No: HC4507A
Ang NGS Protease K usa ka lig-on nga serine protease nga adunay taas nga kalihokan sa enzyme ug lapad nga espesipiko sa substrate. Ang enzyme mas gusto nga madugta ang mga ester bond ug peptide bonds nga kasikbit sa C-terminal sa hydrophobic amino acids, sulfur-containing amino acids ug aromatic amino acids.Mao nga, kini kanunay nga gigamit sa pagpaubos sa mga protina ngadto sa mugbo nga mga peptide.Ang NGS Protease K usa ka tipikal nga serine protease nga adunay Asp39-Iya69-Ser224catalytic triad nga talagsaon sa serine protease, ug ang catalytic center gilibutan sa tow Ca.2+nagbugkos nga mga dapit alang sa pagpalig-on, pagmintinar sa taas nga kalihokan sa enzyme ubos sa mas lapad nga mga kondisyon.
Espesipikasyon
| Panagway | Puti hangtod sa puti nga amorphous powder, lyophilized |
| Piho nga kalihokan | ≥40U/mg solid |
| DNAase | Walay namatikdan |
| RNase | Walay namatikdan |
| Bioburden | ≤50CFU/g solid |
| Ang nahabilin nga nucleic acid | <5pg/mg solid |
Mga kabtangan
| Tinubdan | Tritirachium nga album |
| Numero sa EC | 3.4.21.64(Recombinant gikan sa Tritirachium album) |
| Molekular nga gibug-aton | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelektrik nga punto | 7.81 Fig.1 |
| Labing maayo nga pH | 7.0-12.0 (Ang tanan naghimo ug taas nga kalihokan) Fig.2 |
| Labing maayo nga temperatura | 65 ℃ Fig.3 |
| pH Kalig-on | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Fig.4 |
| Thermal nga kalig-on | Ubos sa 50 ℃ (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| Kalig-on sa pagtipig | Gitipigan sa 25 ℃ sulod sa 12 ka bulan Fig.6 |
| Mga activator | SDS, urea |
| Mga tigpugong | Diisopropyl fluorophosphate;benzylsulfonyl fluoride |
Mga Kondisyon sa Pagtipig
Tipigi ang lyophilized powder sa -25~-15 ℃ sa taas nga panahon layo sa kahayag;Human sa dissolution, aliquot ngadto sa angay nga gidaghanon alang sa hamubo nga termino storage sa 2-8 ℃ gikan sa kahayag o long-term storage sa -25 ~ -15 ℃ gikan sa kahayag.
Panagana
Pagsul-ob ug protective gloves ug goggles kon mogamit o magtimbang, ug pabiling maayo ang bentilasyon human magamit.Kini nga produkto mahimong hinungdan sa reaksiyon sa alerdyi sa panit ug grabe nga pagkalagot sa mata.Kung mahawa, kini mahimong hinungdan sa alerdyi o mga sintomas sa hika o dyspnea.Mahimong hinungdan sa respiratory irritation.
Kahubitan sa yunit
Ang usa ka yunit sa NGS Protease K gihubit isip ang gidaghanon sa enzyme nga gikinahanglan aron ma-hydrolyze ang casein ngadto sa 1 μmol L-tyrosine ubos sa standard determination nga kondisyon.
Pag-andam sa mga reagents
| Reagent | Manufacturer | Katalogo |
| Kasein teknikalgikan sa gatas sa baka | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Trichloroacetic acid | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| Sodium acetate | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| Acetic acid | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| Sodium carbonate | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-phenol | Sangon Biotech (Shanghai)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | Sigma | 93829 |
Reagent I:
Substrate: 1% Casein gikan sa bovine milk solution: dissolve 1g bovine milk casein sa 50ml sa 0.1M sodium phosphate solution, pH 8.0, init sa tubig nga kaligoanan sa 65-70 °C sulod sa 15mins, pagkutaw ug dissolve, bugnaw sa tubig, adjust sa sodium hydroxide ngadto sa pH 8.0, ug dilute ngadto sa 100ml.
Reagent II:
TCA nga solusyon: 0.1M trichloroacetic acid, 0.2M sodium acetate ug 0.3M acetic acid (pagtimbang 1.64g trichloroacetic acid + 1.64g sodium acetate + 1.724mL acetic acid sunod-sunod nga, pagdugang 50mL deionized tubig, adjust sa HCl3, 4. 100ml).
Reagent III:
0.4m sodium carbonate solution (gitimbang 4.24g anhydrous sodium carbonate ug dissolve sa 100mL nga tubig)
Reagent IV:
Folin phenol reagent: dilute 5 ka beses sa deionized nga tubig.
Reagent V:
Enzyme diluent: 0.1 M sodium phosphate solution, pH 8.0.
Reagent VI:
L-tyrosine standard nga solusyon: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine dissolved sa 0.2M HCl.
Pamaagi
1. I-on ang UV-Vis spectrophotometer ug pilia ang photometric measurement.
2. Ibutang ang wavelength nga 660nm.
3. I-on ang kaligoanan sa tubig, ibutang ang temperatura sa 37 ℃, siguroha nga ang temperatura dili mausab sulod sa 3-5mins.
4. Preheat 0.5mL substrate sa usa ka 2mL centrifuge tube sa 37 ℃ tubig bath alang sa 10mins.
5. I-extract ang 0.5mL nga lasaw nga enzyme solution ngadto sa preheated centrifuge tube sulod sa 10 minutos.Ibutang ang enzyme diluent isip blangko nga grupo.
6. Idugang ang 1.0 mL TCA reagent pagkahuman dayon sa reaksyon.Pag-mix og maayo ug i-incubate sa water bath sulod sa 30 minutos.
7. Centrifugate reaksyon solusyon.
8. Idugang ang mosunod nga mga sangkap sa han-ay nga gitakda.
| Reagent | Tomo |
| Supernatant | 0.5 mL |
| 0.4M sodium carbonate | 2.5 mL |
| Folin phenol reagent | 0.5 mL |
9. Pag-mix og maayo sa dili pa i-incubate sa water bath sa 37 ℃ sulod sa 30 ka minuto.
10. OD660gitino isip OD1;blangko nga kontrol nga grupo: Enzyme diluent gigamit sa pag-ilis sa enzyme solusyon sa pagtino OD660kay OD2, ΔOD=OD1-OD2.
11. L-tyrosine standard curve: 0.5mL lain-laing konsentrasyon L-tyrosine solution, 2.5mL 0.4M Sodium carbonate, 0.5mL Folin phenol reagent sa 5mL centrifuge tube, incubate sa 37 ℃ sulod sa 30mins, detect for OD660para sa lain-laing konsentrasyon sa L-tyrosine, unya nakuha ang standard curve Y=kX+b,diin Y ang L-tyrosine concentration, X kay OD600.
Pagkalkula
2: Kinatibuk-ang gidaghanon sa solusyon sa reaksyon (mL)
0.5: Dami sa solusyon sa enzyme (mL)
0.5: Ang gidaghanon sa likido nga reaksyon nga gigamit sa determinasyon sa chromogenic (mL)
10: Oras sa reaksyon (min)
Df: Dilution multiple
C: Konsentrasyon sa enzyme (mg/mL)
Mga numero
Fig.1 DNA residue
| Sampol | Ang Ave C4 | Nucleic Acid Pagbawi(pg/mg) | Pagbawi(%) | Kinatibuk-ang Nucleic Acid ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| H2O nga walay RNA | Dili matino | — | — | — |
Fig.2 Labing maayo nga pH
Fig.3 Labing maayo nga temperatura
Fig.4 pH Stability
Fig.5 Thermal nga kalig-on
Fig.6 Ang kalig-on sa pagtipig sa 25 ℃
