Hotstart Taq DNA Polymerase
Ang Hot Start Taq DNA Polymerase (Pagbag-o sa Antibody) usa ka mainit nga pagsugod nga thermostable nga DNA polymerase gikan sa Thermus aquaticus YT-1，nga adunay 5′→3′ polymerase nga kalihokan ug 5′ flap endonuclease nga kalihokan.Ang init nga pagsugod nga Taq DNA polymerase usa ka Taq DNA polymerase nga giusab sa thermolabile nga Taq antibodies.Ang pagbag-o sa antibody nagdugang sa espesipiko, pagkasensitibo, ug abot sa PCR.
Mga sangkap
| Component | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4 × 1 mL | 4 × 10 mL | 4 × 50 mL | 5×400 mL |
| Mainit nga Pagsugod Taq DNA Polymerase (Giusab ang Antibody) (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 10 × 5 mL |
Mga aplikasyon
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 sa 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 ug 50% Glycerol.
Kondisyon sa Pagtipig
Transportasyon ubos sa 0°C ug tipigan sa -25°C~-15°C.
Kahubitan sa Yunit
Ang usa ka yunit gihubit isip ang gidaghanon sa enzyme nga nag-apil sa 15 nmol sa dNTP ngadto sa acid insoluble nga materyal sulod sa 30 minutos sa 75°C.
Pagkontrol sa Kalidad
1.Endonuclease nga Kalihokan:Ang pagkubkob sa 20 U sa enzyme nga adunay 4 μg pUC19 DNA sulod sa 4 ka oras sa 37 ℃ miresulta sa walay makita nga pagkadaut sa DNA nga gitino sa gel electrophoresis.
2.5 kb Lambda PCR:Ang 25 cycle sa PCR amplification sa 5 ng Lambda DNA nga adunay 1.25 units sa Taq DNA Polymerase sa presensya sa 200 µM dNTPs ug 0.2 µM primers moresulta sa gipaabot nga 5 kb nga produkto.
3.Kalihokan sa Exonuclease:Ang pagkubkob sa 50 µl nga reaksyon nga adunay labing gamay nga 12.5 U sa Taq DNA Polymerase nga adunay 10 nmol 5'-FAM oligonucleotide sa 30 minuto sa 37 ℃ wala’y makit-an nga pagkadaot.
4.Kalihokan sa RNase:Ang pagkubkob sa 10 µL nga reaksyon nga adunay sulod nga 20 U nga enzyme nga adunay 1μg nga RNA transcripts sulod sa 2 ka oras sa 37 ° C nga miresulta sa walay mamatikdan nga pagkadaut sa RNA nga gitino sa gel electrophoresis.
5.Dili aktibo sa init:Dili.
Sistema sa Reaksyon
| Mga sangkap | Tomo |
| Template DNAa | kapilian |
| 10 μM Ipasa nga Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10mM matag usa) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Tubig nga walay nuclease | Hangtod sa 25 μL |
Mubo nga sulat:
1) a.
| DNA | kantidad |
| Genomic | 1 ng-1 ug |
| Plasmid o Viral | 1 pg-1 ng |
2) b.Ang labing maayo nga konsentrasyon sa Taq DNA Polymerase mahimong gikan sa 5-50 units/mL (0.1-0.5 units/25 µL reaction) sa mga espesyal nga aplikasyon.
Thermal cycling protocol
PCR
| Lakang | Temperatura(°C) | Panahon | Mga siklo |
| Inisyal nga denaturationa | 95 ℃ | 1-3mins | - |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 nga mga Siklo |
| Pag-anib | 45-68 ℃ | 15-60 ka s | |
| Extension | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Katapusan nga Extension | 68 ℃ | 5mins | - |
Mubo nga sulat:
1) Ang una nga denaturation sa 1 min sa 95 ° C igo na alang sa kadaghanan sa mga amplification.Alang sa lisud nga mga templates, usa ka mas taas nga denaturation sa 2-3mins sa 95 ° C girekomendar.Sa colony PCR, girekomendar ang inisyal nga 5mins denaturation sa 95°C.
2) Ang annealing nga lakang kasagaran 15-60 s.Ang temperatura sa Annealing gibase sa Tm sa primer nga pares ug kasagaran 45-68 ℃.
