2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Cat No: HCB5151A
Ang SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) gidesinyo sa paghimo sa PCR direkta gikan sa mga sample nga walay DNA extraction o sample nga pag-andam.Kini nga reagent naglangkob sa init nga pagsugod sa DNA polymerase, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, mga dNTP (nga adunay dUTP imbes nga dTTP), ug mga stabilizer, alang sa quantitative PCR (qPCR).Kini nga reagent nag-preform sa taas nga inhibitor-tolerance, ug sa ingon kini mahimong direkta nga magamit sa pagkakita sa mga sample sama sa throat swab, laway, anti-coagulated nga tibuok nga dugo, plasma, ug serum nga walay pagkuha sa DNA.Ang reagent naggamit sa proprietary buffer para sa qPCR nga adunay sinagol nga mga enzyme sa anti-inhibitory DNA polymerase ug UNG enzyme.Busa, makakuha kini og maayo nga pagpadako sa mga target nga gene sa mga sample nga adunay mga inhibitor ug makapugong sa sayup nga positibo nga pagpadako tungod sa nahabilin nga PCR ug polusyon sa aerosol.Kini nga reagent nahiuyon sa kadaghanan nga fluorescent quantitative PCR nga mga instrumento, sama sa Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ug uban pa.
Mga sangkap
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Mga kahimtang sa pagtipig
Ang tanan nga mga sangkap kinahanglan ibutang sa -20 ℃ alang sa dugay nga pagtipig ug 4 ℃ hangtod sa 3 ka bulan.Palihug isagol pag-ayo pagkahuman sa pagtunaw ug pag-centrifuge sa dili pa gamiton.Likayi ang kanunay nga freeze-thaw.
Protocol sa Pagbisikleta
| Lakang | Temperatura | Panahon | Siklo |
| panghilis | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Pag-aktibo sa polymerase | 95 ℃ | 1-5min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| Pag-ani/Pagdugang | 56-64 ℃ | 20-60s |
Mga Instruksyon sa Pipetting
| Reagent | Volume kada reaksyon | Volume kada reaksyon | Katapusan nga Konsentrasyon |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1 × |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1 × |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Sampol3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Kinatibuk-ang gidaghanon | 25 μL | 50 μL | - |
1. Ang katapusan nga konsentrasyon sa primer kasagaran 0.2μM.Alang sa mas maayo nga mga resulta, ang primer nga konsentrasyon mahimong ma-optimize sulod sa han-ay sa 0.2-1μM.
2. Sa kinatibuk-an, ang konsentrasyon sa probe mahimong ma-optimize sulod sa range nga 0.1-0.3μM.Ang labing kamalaumon nga konsentrasyon sa probe adunay kalabotan sa tinuod nga oras nga instrumento sa pagpadako sa PCR, ang tipo sa pagsusi, ug ang tipo sa substansiya sa pag-label sa fluorescent.Palihug tan-awa ang manwal sa instrumento o ang piho nga mga kinahanglanon sa matag fluorescent probe.
3. Ang lain-laing mga matang sa mga sample adunay lain-laing mga matang ug sulod sa inhibitor ug kopya gidaghanon sa target gene.Ang gidaghanon sa sample kinahanglan nga tagdon sa aktuwal nga kahimtang.Paghimo og dilution sa sample pinaagi sa pagdugang og nuclease-free nga tubig o TE Buffer, kon gikinahanglan.
4. Girekomenda nga gidaghanon sa lain-laing mga sample:
| Sampol | Volume para sa usa 50 μL reaksyon | Maximum ratio |
| Anticoagulated tibuok dugo | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Tutonlan swab | 10 μL | 20% |
| laway | 10 μL | 20% |
Pagkontrol sa Kalidad
1. Function detection: sensitivity, specificity ug repeatability sa qPCR.
2. Walay exogenous nuclease nga kalihokan: walay exogenous endonuclease ug exonuclease polusyon.
Mga Nota sa Produkto
1. Kini nga produkto naggamit sa usa ka nobela nga tipo sa hot-start DNA polymerase, nga mahimong ma-activate sa 1-5 ka minuto. Tungod kay ang reaksyon buffer niini na-optimize, kini mas angay alang sa double o multiple fluorescence quantitative PCR gamit ang probe method.
2. Kung ang Rn nga kantidad sa PCR amplification ubos kaayo o ang amplification klaro nga gipugngan, ang pagkunhod sa sample nga kantidad, ang pagdugang sa gidaghanon sa reaksyon o ang miaging pagtunaw sa sample mahimong makapauswag sa mga resulta.
3. Ang pagkolekta sa dugo, laway, ihi, throat swab, ug uban pa kinahanglang mosunod sa mga kinahanglanon sa clinical criteria, ug ang lab-as nga sample mahimong gamiton aron mapugngan ang nucleic acid degradation.
4. Tungod kay ang lainlaing mga amplicon adunay lainlaing kahusayan sa paggamit sa dUTP ug pagkasensitibo sa UNG, ang mga reagents kinahanglan nga ma-optimize kung ang pagkasensitibo sa detection mikunhod kung gigamit ang sistema sa UNG.Palihug kontaka kami alang sa teknikal nga suporta kung gikinahanglan.
5. Aron malikayan ang pagpadako sa mga produkto sa pagdala sa PCR tali sa usa ka lakang nga mga reaksyon, gikinahanglan ang gipahinungod nga lugar sa eksperimento ug pipette alang sa pagpadako.Pag-opera gamit ang mga gwantis ug pag-ilis kanunay ug ayaw ablihi ang reaction tube pagkahuman sa PCR amplification.
